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熒游標記細胞株分離與培養要求

點選次數₪·↟◕☁:442 釋出時間₪·↟◕☁:2022-01-14
   熒游標記細胞株使用注意事項₪·↟◕☁:
  1▩↟、懸浮細胞用此法時必須經離心後才能吸出上清再加DMSO↟◕。
  2▩↟、Formazan 的生成不僅與活細胞數成比例▩✘,也受作用時間的影響▩✘,因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變↟◕。
  3▩↟、MTT 溶液為黃色▩✘,需避光儲存▩✘,長時間光照會導致失效↟◕。當顏色變為灰綠色時▩✘,請勿使用↟◕。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固▩✘,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解後使用↟◕。
  4▩↟、為了您的安全和健康▩✘,請穿實驗服並戴一次性手套操作↟◕。

  熒游標記細胞株分離與培養₪·↟◕☁:
  1▩↟、無菌條件下▩✘,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織▩✘,然後用PBS將此組織塊清洗2次▩✘,後將組織剪成1mm3左右大小;
  2▩↟、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶)▩✘,混懸10s▩✘,置37℃條件下消化10min▩✘,之後用滴管吹打製成單細胞懸液▩✘,自然沉澱並收集上清▩✘,用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置;
  3▩↟、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液▩✘,混懸10s▩✘,置37℃消化10 min後▩✘,按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置▩✘,重複此步驟2-3次▩✘,直至組織完全被消化;
  4▩↟、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液▩✘,1200r/min 離心10min▩✘,棄去上清▩✘,沉澱細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸▩✘,接種於25cm2培養瓶▩✘,放置於37℃ ▩✘,5%CO2 培養箱中培養;
  5▩↟、差速貼壁1h後▩✘,吸出培養基▩✘,按實驗需要接種於6孔板中繼續培養;
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